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Author:
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Montaner Tarbes, Sergio Roberto; Fernández, Zoraida; Jiménez, Angélica; Ruiz, Johanny; Carrozza, Marifel; Rivero, José; Herrera, Flor
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Notes:
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El virus DENV-3 es el responsable del segundo mayor porcentaje
de afecciones hemorrágicas severas causadas por este virus,
solo superado por el virus DENV-2. La virulencia de este serotipo,
causante de brotes epidémicos a gran escala en países como
Venezuela donde circula activamente durante todo el año, es la
razón principal del desarrollo investigativo en el campo de las
interacciones virus-vector en la búsqueda de un control epidémico
efectivo. En el presente trabajo, se evaluó la expresión de dos
genes, RNAi (dcr-2 y ago-2), que codi¿can para proteínas de
respuesta antiviral en mosquitos con la ¿nalidad de estudiar el
cambio en la expresión de los mismos en el vector una vez infectado
con el DENV-3. Para ello, se infectó arti¿cialmente una población
de Aedes (stegomyia) aegypti de Trujillo, elaborándose dos grupos
experimentales (15dpi y 20dpi) y un control; posteriormente se
aisló, cuanti¿có y se realizó transcripción reversa al RNA total
aislado de los grupos. La infección en los grupos experimentales
se evidenció por la detección de bandas de productos de PCR de
511pb para DENV y 290pb para DENV-3 mediante electroforesis
en gel de agarosa al 2%, y se realizó la cuanti¿cación relativa de
la expresión genética por PCR en tiempo real. Como resultado, la
expresión de los genes no presentó cambios con respecto a los
mosquitos no infectados (grupo control) (p<0.05). Estos resultados
indican que el virus DENV-3 pudiera estar mostrando mecanismos
de evasión sobre las vías de RNAi dentro del cuerpo del vector,
y esto puede estar relacionado al hecho de que la replicación de
los miembros del genero Flavivirus, entre ellos el DENV, se lleva a
cabo en el sistema de membranas y vesículas, lo que les permite
evadir el encuentro en el citoplasma con las proteínas asociadas
al complejo de RNAi.
RNAi antiviral pathway genes in mosquitoes to study the fold change in the expression of these genes in the mosquito vector Aedes (stegomyia) aegypti infected with DENV-3. We arti¿cially infected a population of mosquitoes from Trujillo state (Venezuela) and prepared three (3) experimental groups (15dpi, 20dpi and a control group). Later, we isolated, quanti¿ed and applied a reverse transcription to the total RNA obtained of mosquitoes and the infection in the experimental groups was detected performing a 2% agarose gel electrophoresis of the PCR products of the total RNA (511bp for DENV and 290bp for DENV-3). In addition, the infection in the experimental groups was confirmed by the detection of PCR products. The fold change in dcr-2 and ago2 expression genes was quantify by Real Time PCR. The fold change in dcr-2 and ago2 expression genes was quantify by Real Time PCR. As results, the fold change expression in the ago-2 and dcr-2 were equal to the non-infected mosquitoes 'control group' (p>0.05). These results indicate that DENV-3 could have evasion mechanisms of RNAi pathway inside vector's body, and this can be related to the fact that dengue virus replication is accomplished in the vesicle system and membrane system as well (endoplasmic reticulum and golgi complex) avoiding cytoplasmic encounter with the RNAi pathway proteins. |
