Bacillus firmus I-1582 is a bacterium with nematicidal effects on root-knot nematodes, a group of plant parasites pertaining to the genus Meloidogyne. This bacterium is able to colonize the plant rhizosphere of some economically important crops and protect them from nematode parasites by reducing their juvenile hatching, their only infective stage. In this final degree project B.firmus was transformed with a green fluorescent protein gene. To transform the bacterium it was necessary the previous protoplast formation using lysozyme and the addition of polyethylene glycol. The plasmid containing this gene, pAD43-25, was cloned and extracted from an E.coli ECE166 culture. Once the plasmid was stable, the transformant was inoculated in tomato roots and nematode eggs. The samples were analyzed after 48 hours at 35°C with confocal laser microscopy to watch the distribution of the bacteria and the biofilm formation, which was fluorescent too. In the taken images is shown that the bacterium was not able to colonize the root neither penetrate the eggs. Although it seems that some of the bacterial cytoplasmic products can cross the egg wall.

Bacillus firmus I-1582 es un bacteri amb efectes nematicides en nematodes formadors d'agalles, un grup de paràsits de plantes que pertanyen al gènere Meloidogyne. Aquest bacteri es capaç de colonitzar la rizosfera de plantes d'alguns cultius econòmicament importants i protegir-los dels nematodes paràsits reduint la emergència dels juvenils. En aquest treball de fi de grau B.firmus va ser transformat amb un gen de la proteïna verd fluorescent. Per transformar el bacteri va ser necessària la prèvia formació de protoplasts utilitzant lisozima i la adició de polietilenglicol. El plasmidi que conté el gen, pAD43-25 va ser clonat i extret d'un cultiu d'E.coli ECE166. Un cop el plasmidi era estable, els transformants van ser inoculats a arrel de tomàquet i ous de nematodes. Les mostres van ser analitzades després de 48 hores a 35°C amb microscòpia làser confocal per observar la distribució dels bacteris i la formació de biofilm, el qual també era fluorescent. A les imatges presses s'aprecia que el bacteri no ha estat capaç de colonitzar l'arrel y que tampoc ha penetrat als ous. No obstant sí que sembla que alguns productes citoplasmàtics del bacteri poden travessar la paret de l'ou.

Bacillus firmus I-1582 es una bacteria con efectos nematicidas en nematodos formadores de agallas, un grupo de parásitos de plantas pertenecientes al género Meloidogyne. Esta bacteria es capaz de colonizar la rizosfera de plantas de algunos cultivos económicamente importantes y protegerlos de los nematodos parásitos reduciendo la emergencia de juveniles, su única etapa infectiva. En este trabajo de fin de grado B.firmus fue transformado con un gen de la proteína verde fluorescente. Para transformar la bacteria fue necesaria la previa formación de protoplastos usando lisozima y la adición de polietilenglicol. El plásmido que contiene el gen, pAD43-25, fue clonado y extraído de un cultivo de E.coli ECE166. Una vez el plásmido era estable, los transformantes fueron inoculados en raíz de tomate y huevos de nematodos. Las muestras fueron analizadas después de 48 horas a 35°C con microscopía láser confocal para observar la distribución de las bacterias y la formación de biofilm, el cual también era fluorescente. En las imágenes tomadas se aprecia que la bacteria no ha sido capaz de colonizar la raíz y que tampoco ha penetrado en los huevos. No obstante sí que parece que algunos productos citoplasmáticos de la bacteria puedan atravesar la pared del huevo.