Títol:
|
Expressió, purificació i cristal·lització de la proteïna HMGA1a humana amb oligonucleòtids rics en ATs
|
Autor/a:
|
Sánchez Giraldo, Raquel
|
Altres autors:
|
Universitat Politècnica de Catalunya. Departament d'Enginyeria Química; Saperas Plana, Núria |
Abstract:
|
En tota mena de càncers es troben altes concentracions de proteïnes HMGA. Per comprendre
el mecanisme d’acció d'aquestes proteïnes cal determinar l’estructura tridimensional dels
complexos d’aquestes amb el DNA.
Amb aquesta finalitat en aquest projecte es persegueix l’obtenció de co-cristalls de la proteïna
HMGA1a i els seus fragments amb oligonucleòtids sintètics rics en seqüències ATs i també
provar la cristal·lització d’un pèptid sintètic amb una seqüència similar a la proteïna amb
aquests mateixos oligonucleòtids.
En primer lloc, s’han obtingut la proteïna HMGA1a humana (i els seus fragments) a partir de
la seva expressió en un cultiu bacterià d’Escherichia coli utilitzant la tecnologia del DNA
recombinant. Posteriorment s’ha purificat aquesta proteïna fins al grau adient pels experiments
de cristal·lografia. Aquesta purificació s’ha realitzat amb cromatografies de bescanvi catiònic i
s’ha estudiat quines són les condicions més òptimes per a l’obtenció de la proteïna HMGA1a.
En una segona etapa, a partir dels complexos DNA-proteïna, hem obtingut cristalls mitjançant
la tècnica de difusió de vapor amb gota penjada. Els cristalls han estat difractats amb raigs X a
les instal·lacions del sincrotró de Grenoble ESRF. Amb l’estudi de les intensitats de les
reflexions hem intentat resoldre l'estructura molecular pel mètode del reemplaçament
molecular.
Finalment hem trobat els paràmetres de cel·la, el grup espacial i l’empaquetament de dues
seqüències d’oligonucleòtids. També en tots dos casos hem arribat a un model estructural
aproximat de les cadenes de DNA en l’espai però en cap d’ells s’aprecia clarament la
presència de la part proteica. |
Matèries:
|
-Àrees temàtiques de la UPC::Enginyeria química::Química orgànica::Bioquímica -Nonhistone chromosomal proteins -- Analysis -DNA-protein interactions -Oligonucleotides -Proteïnes cromosomàtiques no histones -- Anàlisi -ADN -- Interaccions de les proteïnes -Oligonucleòtids |
Drets:
|
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Spain
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/ |
Tipus de document:
|
Projecte/Treball fi de carrera o de grau |
Publicat per:
|
Universitat Politècnica de Catalunya
|
Compartir:
|
|