Produccción de Coenzima M en Saccharomyces cerevisiae. Uso de Saccharomyces cerevisiae como modelo en la producción de metano

Abstract

El proyecto consiste en introducir la ruta de producción de Coenzima M en un organismo modelo como es la levadura Saccharomyces cerevisiae. La Coenzima M es un metabolito esencial en la producción de metano en los organismos metanogénicos. Mediante análisis de optimización de codones para la expresión en S. cerevisiae, se han diseñado los genes comA y comB (que codifican para los dos primeros enzimas de la ruta biosintética de Coenzima M) partiendo de las secuencias respectivas en la bacteria Bacillus subtilis. En paralelo, es necesario fabricar 4 vectores de clonación con un promotor regulable funcional en la levadura y con marcadores de selección distintos entre sí, de los cuales en este trabajo se han construido dos. Estos vectores son integrativos para no tener problemas con la pérdida de plásmido, y son portadores del promotor tetO regulable por tetraciclina, bajo el control del cual se coloca el gen respectivo. El objetivo final es que en cada vector se exprese en levadura cada uno de los 4 genes de la ruta, habiéndose clonado en este trabajo el gen comA y comB y habiéndose comprobado también la expresión del mismo en la levadura mediante Northern blot. El proyecto se engloba en el marco de poder eliminar la producción de metano que realizan microorganismos del rumen de los rumiantes.