Clonació del gen de l'envolta de vih en el plàsmid pnl Δenv-Ren per la obtenció de recombinants

Abstract

Estudi elaborat a partir d’una estada al Laboratori de Inmunopatología del SIDA del Dr Alcamí a l’Instituto de Salud Carlos III-Centro Nacional de Microbiologia, entre finals de desembre de 2006 i març de 2007. L’objectiu ha estat millorar la caracterització de l’envolta del VIH-1 mitjançant l’obtenció de virus recombinants, ja que això permet estudiar l’envolta viral tant genètica com fenotípicament. En aquest cas, s’ha estudiat l'envolta viral dels pacients sotmesos a vacunació terapèutica amb cèl•lules dendrítiques polsades amb virus autòlegs. Durant aquesta estada es realitza un aprenentatge profund de les tècniques adequades per a l'amplificació i clonatge del gen complet de l'envolta del VIH-1 (env), així com de l’obtenció de virus recombinants amb l’envolta del pacient i els corresponents assaigs de tropisme viral i neutralització sèrica. Aquesta metodologia empra el virus quimèric pNL4.3 delta_env Renilla, construït a partir del virus de referència NL4.3 i que té dues característiques importants: la primera és que conté un gen marcador Renilla, que a l’interior de les cèl•lules infectades té activitat luciferasa. La utilització del virus pNL4.3 delta_env Renilla en assaigs de neutralització presenta diversos avantatges front altres assaigs més convencionals, tant a nivell de sensibilitat i especificitat com d’estalvi de temps.

Report for the scientific sojourn at the Dr Alcamí’s Laboratori de Inmunopatología del SIDA at the Instituto de Salud Carlos III-Centro Nacional de Microbiologia from the end of December 2006 until March 2007.The goal has been to improve the characterization of the envelope of the HIV-1 through the obtaining of recombinant virus, because this allow us to study genetic and phenotypically the viral envelope. In this case, this is applied in the study of the viral envelope of patients subjected to therapeutic vaccination with dendritic cells pulsed with autologous viruses. During this stay it is made a deep learning of the techniques suitable for the amplification and cloning of the entire envelope gene of the HIV-1 (env), as well as the obtaining of recombinant viruses that contain the autologous envelope of each patient and the corresponding viral tropism and serum neutralization assays. This methodology uses the pNL4.3 delta_env Renilla chimerical virus, constructed from the reference virus NL4.3 and which has two important characteristics: the first is that contains a Renilla marker gene, which inside the infected cells has luciferase activity. The utilization of pNL4.3 delta_env Renilla in neutralization assays shows different advantages front other more conventional assays, at levels of sensitivity and specificity as well as of saving of time.